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上篇基因克隆理论1

第一章 概论1

第一节 基因研究的历史回顾1

第二节 遗传的物质基础2

第三节 基因和基因克隆的概念3

第四节 基因工程的研究内容和安全性4

第二章 基因的结构和功能8

第一节 核酸的结构和功能8

第二节 遗传物质的组织结构13

第三节 基因组的结构和功能21

第三章 蛋白质的结构和功能33

第一节 蛋白质的基本单位和分类33

第二节 蛋白质的分子结构和理化性质37

第三节 蛋白质的生物学功能47

第四章 基因克隆中常用的工具酶50

第一节 限制性核酸内切酶50

第二节DNA聚合酶54

第三节DNA连接酶58

第四节 修饰酶59

第五章 基因克隆的载体63

第一节 质粒载体63

第二节 噬菌体载体77

第三节 病毒载体82

第四节 其他载体89

第六章 基因的表达和调控93

第一节 原核生物基因的表达调控94

第二节 真核生物基因的表达调控110

第七章 基因克隆在治疗和诊断中的应用与进展125

第一节 基因治疗研究进展125

第二节 基因诊断的研究进展128

第八章 基因克隆技术在生物制药中的应用134

第一节 概况134

第二节 基因工程药物135

第三节 基因工程抗体135

第四节 基因工程疫苗136

第五节 核酸疫苗137

第六节 生物医药的发展方向137

下篇 基因克隆技术139

第九章 分子生物实验中的常用仪器及试剂的配制139

第一节 分子生物实验室的常规仪器及设备139

第二节 常用试剂的配制141

第十章 琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳145

第一节 原理145

第二节 琼脂糖电泳145

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳146

第四节 电泳的影响因素147

第五节 电泳中常用的指示剂和染色剂148

第十一章 目的基因克隆149

第一节 化学合成法获取目的基因149

第二节PCR扩增法获取目的基因149

第三节RT-PCR法获取目的基因154

第十二章 载体的准备157

第一节 感受态细胞的制备和质粒的转化157

第二节 质粒DNA的提取158

第十三章 目的基因与载体的连接160

第一节 目的基因和载体的酶切160

第二节 从凝胶中回收DNA162

第三节 目的基因和载体的连接163

第十四章 重组载体的检测166

第一节 酶切和电泳检测166

第二节DNA序列测序鉴定166

第十五章 重组载体的转染172

第一节 磷酸钙共沉淀法172

第二节 脂质体法172

第三节 反转录病毒感染法173

第四节 腺病毒载体转染法174

第五节 结果和转染方法的选择175

第十六章 重组体插入基因、RNA和表达产物蛋白质的检测177

第一节Southern blot177

第二节Northern blot180

第三节Western blot182

第十七章 大鼠BDNF基因的构建及骨髓间充质干细胞转染187

第一节 实验原理与实验目的187

第二节 实验设备、试剂及配制187

第三节 实验步骤193

第十八章 纳米粒子介导人生存素基因修饰嗅鞘细胞实验210

第一节 实验原理210

第二节 实验所需设备、试剂及其配制211

第三节 实验步骤212

第四节 实验结果216

第五节 结果分析218

第十九章 小鼠NT-4基因的体外构建、骨髓间充质干细胞转染和脑内移植221

第一节 实验目的及实验原理221

第二节 小鼠NT- 4基因的体外构建及骨髓间充质干细胞转染221

第三节NT- 4-GFP转基因骨髓间充质干细胞脑内移植234

第四节 结果分析与经验体会239

第二十章 慢病毒携带人端粒酶基因 hTERT的基因克隆技术240

第一节 实验目的240

第二节 实验设备、试剂及其配制240

第三节 实验步骤248

第四节 实验结果259

第五节 结果分析262

第六节 经验体会263