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实验须知1

第一章 实验技术与方法1

第一节 基本实验操作1

一、玻璃仪器的洗涤和干燥1

二、常用普通仪器及其使用2

三、液体混匀法5

第二节 分光光度技术6

一、基本原理6

二、分光光度计的结构和工作原理9

三、常见分光光度计10

四、扫描光密度计13

五、测定物含量的计算方法13

第三节 层析技术15

一、纸层析16

二、薄层层析17

三、离子交换层析17

四、凝胶层析19

五、高效液相层析21

六、气相层析21

七、亲和层析21

第四节 电泳技术22

一、基本原理22

二、影响电泳的因素24

三、电泳的分类26

四、电泳仪器设备简介27

五、几种常见的电泳27

六、电泳技术的应用31

七、PAGE结果不正常现象与对策32

第五节 离心分离技术33

一、基本原理33

二、离心机的分类和使用方法34

三、特殊的离心分离技术38

第六节 核酸与蛋白分析技术40

一、聚合酶链式反应技术40

二、Southern印迹杂交技术42

三、Northern印迹杂交技术43

四、Western印迹法43

第二章 基本实验44

第一节 氨基酸、蛋白质与酶44

实验一 蛋白质含量的测定44

实验二 血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳及定量分析49

实验三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量52

实验四 蛋白质印迹免疫分析57

实验五 血清超薄SDS-琼脂糖凝胶电泳59

实验六 凝胶层析分离血红蛋白和维生素B261

实验七 离子交换层析分离氨基酸62

实验八 心、肝、肾组织乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离64

实验九 蛋白质的双向电泳67

第二节 核酸71

实验十 核酸含量的测定71

实验十一 DNA的电泳及限制性内切酶谱分析74

实验十二 组织细胞基因组DNA的提取77

实验十三 质粒DNA的提取与鉴定79

实验十四 核糖核酸的提取及成分鉴定82

实验十五 动物组织总RNA的提取84

实验十六 聚合酶链式反应扩增DNA片段85

第三节 物质代谢87

实验十七 肝糖原的提取与鉴定87

实验十八 改良赖氏法测定血清ALT活性88

实验十九 二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮含量91

实验二十 肌糖原的酵解作用93

实验二十一 乳酸脱氢酶及辅酶Ⅰ95

第三章 综合性实验98

实验二十二 标准曲线的制作及回收试验98

实验二十三 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定100

实验二十四 碱性磷酸酶的提取和比活性测定106

第四章 设计性实验110

实验二十五 酶促反应动力学实验的设计110

实验二十六 PCR引物设计115

附录118

一、实验室安全防护及意外事故处理118

二、实验误差及其产生原因与纠正119

三、化学试剂纯度分级表121

四、常用限制性内切酶酶切位点121

五、质粒pBR322的物理图谱122

六、λDNA（48502bp）常用限制性酶切位点122

七、常用术语英汉对照表124